Выделение штаммов углеводородокисляющих микроорганизмов из нефтезагрязненной почвы и препарата «байкал эм-1»

Янгубаева Виолетта Константиновна *
Никитина Валентина Степановна**

Проблема охраны окружающей среды от загрязнений нефтью и нефтепродуктами приобретает все большую актуальность в связи с ограниченностью возможностей, а иногда и экологической небезопасностью применения для этих целей механических, физических и химических способов очистки. В связи с этим актуальной является возможность использования для целей очистки микроорганизмов, способных расти и проявлять активную биохимическую деятельность по отношению к нефтезагрязнениям.

Целью настоящей работы являетсяпоиск углеводородокисляющих микроорганизмов, определение их биодеградирующей способности относительно нефтяных углеводородов и создание на их основе эффективных консорциумов.

На первом этапе работы выделяли углеводородокисляющие микроорганизмы непосредственно из нефтезагрязненной почвы, отобранной в районе нефтеперерабатывающего завода г. Ишимбай. Выделение микроорганизмов из почвы проводили с помощью метода разведений [3]. В нашем случае это концентрации 10^-4 и 10^-6. Сначала готовили питательный раствор с агаром, разливали его в чашки Петри, вводили по 1 мл разведения почвы и по 0,5 мл дизельного топлива. Затем выросшие колонии перепосевали на жидкие синтетические питательные среды с тремя солями и помещали на мешалку. В течение 21 суток денситометром проверяли оптическую плотность.

Необходимо было определить эффективность действия выделенных микроорганизмов на углеводородные субстраты. Для этого был сделан перепосев выращенных колоний на чашки Петри, куда было добавлено дизельное топливо. Результаты роста колоний на углеводородном субстрате были проведены через неделю после перепосева. По результатам наблюдался хороший рост колоний, что доказывало их эффективность.

В результате проведенных морфологических исследований выделенных микроорганизмов были выявлены штаммы бактерий следующих родов: Pseudomonas и Rhodococcus.

После переноса колоний на жидкие синтетические среды, в течение 21 суток измерялась оптическая плотность. По результатам можно видеть, что рост оказался высоким и уверенным.

Рис. 1. Рост штаммов бактерий, выделенных из нефтезагрязненной почвы, при

использовании в качестве источника углерода дизельного топлива и бензола.

Следующим этапом было получение микроорганизмов для биодеградации нефтепродуктов из биопрепарата «Байкал ЭМ-1». Согласно инструкции, прилагаемой к товарному концентрату биопрепарата Байкал ЭМ-1, его разводили в 3 литрах воды. Прикармливали микроорганизмы из биопрепарата патокой в течение 7 дней. Затем проводили рост и селективное выделение микроорганизмов на субстратах дизельное топливо, где были выявлены две группы колоний, предположительно отнесенных нами к двум родам Pseudomonas и Mycococcus.

Далее отбирали колонии и пересаживали в колбы с питательной средой с тремя солями. Образцы ставили на мешалку и в течение 21 суток замеряли оптическую плотность. Как видно из рисунка 2, штаммы бактерий, выделенные из Байкал ЭМ-1, хорошо развивались в заданной нами среде дизельного топлива.

Рис 2. Рост штаммов бактерий, выделенных из «Байкал ЭМ-1», при

использовании в качестве источника углерода дизельного топлива и бензола.

По проделанной работе можно сделать следующие выводы: из нефтезагрязненной почвы выделены активные углеводородокисляющие штаммы, отнесенные по морфологическим признакам к Pseudomonas и Rhodococcus, а из препарата «Байкал ЭМ-1» выделены штаммы бактерий, предположительно отнесенные к родам Pseudomonas и Mycococcus. Показано, что выделенные штаммы способны расти на субстратах, содержащих дизтопливо.

Список литературы:

1. Бахмуцан В.П., Живолуп А.И. Опыт применения препарата «Байкал ЭМ-1» при компостировании осадка сточных вод. Николаев, 2001. – № 12. – С. 21-22.

2. Безуглова О.С. Ремедиация нефтезагрязненных черноземных почв с помощью препарата «Байкал ЭМ-1». Ростов-на-Дону, 2008. – С. 17-19.

3. Вестник Башкирского государственного университета. Н. Д. Рябцева, В. С. Никитина, А. А. Кадиров, М. И. Абдуллин. Способность культуры Candidasp. к биодеградации нефтепродуктов. – 2015. - №4. – С. 1227-1229.

4. Кисленко В. Н. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммуно логии. М.: Колосс, 2005.— 232 с.

5. Сухамера С.А., Шаблин П.А., Халтурин Е.В. ЭМ - технология – технология XXI века. Алматы, 2006. – С. 55 – 58.